Russian to English Medical Biology (-tech,-chem,micro-) antibody development

Продукты обратной транскрипции использовали в качестве матрицы в двухступенчатой полимеразной цепной реакции для получения генов вариабельных доменов, фланкированных сайтами рестрикции, с использованием набора олигонуклеотидов и протоколам авторов [J Biol Chem. 1999 Jim 25; 274(26):18218-30]. Создание химерных Fab, специфичных против IL-17A, проводили согласно технологии, описанной в международной публикации WO 93/06213, на основе оригинальной фагмиды pH 5, описанной выше. Для этого, соединение генов вариабельных доменов легких цепей доноров человека с геном вариабельного домена тяжелой цепи антитела А1 ламы в один фрагмент проводили путем последовательных реакций рестрикции, лигирования и амплификации, согласно схеме, приведенной на Рис.6А. Аналогично, соединение гена вариабельного домена легкой цепи антитела клона А1 ламы с генами вариабельных доменов тяжелых цепей доноров человека с геном вариабельного домена тяжелой цепи антитела клона А1 ламы в один фрагмент проводили путем последовательных реакций рестрикции, лигирования и амплификации, согласно схеме, приведенной на Рис.6B. При этом расчетное количество молекул матрицы генов вариабельных доменов человека во всех реакциях составляло не менее 1012. Полученный ДНК препарат VL-CK-VH обрабатывали рестриктазами NheI /Eco91I и лигировали в оригинальную фагмиду pH 5.